Avaliação do efeito da miltefosina associada à cisteína proteinase recombinante Ldccys1 sobre o tratamento da infecção pela Leishmania (Leishmania) amazonensis in vitro

Abstract

Muita ênfase tem sido dada ao desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas para as leishmanioses, incluindo o reposicionamento de fármacos e a associação de alguns compostos leishmanicidas com moléculas imunomoduladoras. A Miltefosina, um análogo aquilfosfolipídico inicialmente descrito como agente tumoricida, apresenta atividade contra diversas espécies de Leishmania. Estudos prévios mostraram a eficácia do tratamento das leishmanioses cutânea e visceral com a cisteína proteinase recombinante de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi rLdccys1. No presente estudo foi avaliado o efeito da associação da Miltefosina com a rLdccys1 sobre a infecção pela L. (L.) amazonensis in vitro. O índice de seletividade da Miltefosina e da rLdccys1 foi previamente determinado, sendo de 19,2 e 26,78, respectivamente. O tratamento de macrófagos infectados in vitro com a L. (L.) amazonensis utilizando Miltefosina em associação com a rLdccys1 resultou na redução significantemente maior do índice de infecção comparada à obtida pelo tratamento com esses compostos isoladamente. Houve secreção significante de óxido nítrico pelos macrófagos tratados com a rLdccys1 e a associação Miltefosina+ rLdccys1, enquanto que a secreção de IFN-? foi muito baixa em todas as culturas tratadas e em nenhuma delas houve produção de IL-4. O perfil da resposta de linfócitos T induzida pelo tratamento com essa associação foi avaliado em culturas de macrófagos tratados e cocultivados com linfócitos isolados de camundongos BALB/c previamente infectados com a L. (L.) amazonensis. Houve redução significante da carga parasitária nas culturas tratadas e cocultivadas com os linfócitos comparada à do controle sem tratamento, sendo significantemente maior essa redução nas culturas tratadas com a associação Miltefosina+ rLdccys1. A secreção de óxido nítrico foi significantemente maior nas culturas tratadas com a rLdccys1 ou Miltefosina + rLdccys1, enquanto que a produção de IL-4 foi reduzida nas culturas tratadas comparada à do controle sem tratamento, sendo significantemente menor a dos macrófagos tratados com a associação. Por outro lado, a secreção de IFN-y foi maior nas culturas tratadas comparada à do controle e significantemente maior nos macrófagos tratados com Miltefosina + rLdccys1. Esses resultados indicam que a associação da Miltefosina com a rLdccys1 leva à indução de uma resposta inflamatória importante contra a L. (L.) amazonensis e abrem a perspectiva de utilizar essa associação para o tratamento in vivo.