Avaliação do mecanismo de resistência 23S à azitromicina e caracterização genotípica de isolados de neisseria gonorrhoeae na cidade de São Paulo - Brasil

Abstract

A gonorreia, segunda Infecção Sexualmente Transmissível (ISTs) bacteriana mais frequente, é causada por Neisseria gonorrhoeae, sendo sintomática em 90% dos homens e 50% das mulheres. Atualmente, as cefalosporinas de espectro estendido são preconizadas para o tratamento de infeções por N. gonorrheae. Além disso, o tratamento empírico de uretrites inclui a azitromicina, em função de sua atividade frente a Chlamydia tracomatis. A azitromicina pertence à classe dos macrolídeos e inibe a síntese proteica por ligar-se a região 23S do rRNA. Em 2016, foi relatada a primeira falha terapêutica dessa associação, devido à redução de sensibilidade à azitromicina. Essa redução de sensibilidade pode ser causada por mutações nos alelos do gene 23S, que podem ocorrer nas posições A2059 e/ou A2611. Quanto maior o número de alelos mutados, maior será a concentração inibitória mínima (CIM), sendo que, quando há um alelo mutado, a probabilidade de surgimento de mutações nos demais alelos aumenta. No Brasil, ainda há relatos escassos sobre as taxas de resistência à azitromicina. Portanto, o objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de sensibilidade de isolados clínicos de N. gonorrhoeae provenientes da cidade de São Paulo, avaliar a similaridade genética dos isolados com redução de sensibilidade à azitromicina e determinar os possíveis mecanismos de resistência a este antimicrobiano. Um total de 124 isolados clínicos de N. gonorrhoeae foram coletados entre os anos de 2003 a 2015, provenientes de pacientes ambulatoriais do Centro de Referência e Treinamento em DST/AIDS ? CRT Santa Cruz, São Paulo ? SP. Estes isolados foram identificados pela técnica de MALDI-TOF MS. As CIMs de penicilina, ceftriaxona, ciprofloxacina e azitromicina foram determinadas pela técnica de diluição em ágar e interpretadas de acordo com o EUCAST. Os isolados que apresentaram redução de sensibilidade à azitromicina foram submetidos à técnica de PFGE para caracterização de sua similaridade genética. Isolados com 80% ou mais de similaridade foram incluídos em um mesmo grupo clonal. Um isolado de cada grupo clonal foi selecionado para avaliação de mutações nos alelos do gene rRNA 23S. Essas regiões foram amplificadas utilizando primers específicos e sequenciadas usando o Big Dye Terminator kit e o sistema ABI PRISM 3500. As sequências obtidas foram comparadas às da cepa de N. gonorrhoeae FA 1090 usando o software LaserGene. Todos os isolados tiveram sua identificação confirmada por MALDI-TOF, sendo que a maior parte das amostras avaliadas foram coletadas em 2003 (29/124). Dentre as 124 amostras, foi observada uma redução de sensibilidade para penicilina, ciprofloxacina e azitromicina em 89,6% (112/124), 28% (35/124), e 30,6% (37/121) dos isolados, com CIMs variando entre =0,015 e >4 µg/mL, =0,00025 e >2 µg/mL, e =0,015 e >1 µg/mL, respectivamente. Nenhum isolado apresentou redução de sensibilidade à ceftriaxona, com CIMs que variaram entre =0,001 e 0,06 µg/mL. Os isolados com redução de sensibilidade à azitromicina foram distribuídos em nove grupos clonais, sendo o clone I o mais frequente, o qual continha doze isolados distribuídos ao longo dos anos. Um isolado de cada clone foi selecionado para o sequenciamento dos alelos do rRNA 23S. Após comparação com as sequências dos alelos da cepa de N. gonorrhoeae FA1090, observou-se que apenas uma amostra (256) apresentou mutação nos 4 alelos do rRNA na posição 2611. A redução de sensibilidade à ciprofloxacina e/ou à azitromicina, tratamento empírico combinado de escolha no Brasil até 2015, foi observada desde 2003. Embora tenha sido possível observar a presença de um clone predominante entre os isolados resistentes à azitromicina, outros genótipos foram detectados entre as amostras, indicando que o surgimento e disseminação desse fenótipo não foi causada pela disseminação de um único clone epidêmico.