Clonagem e caracterização de genes que codificam para "proteínas hipotéticas" expressas em epimastigotas e tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruzi

Abstract

O protozoário Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas e, apesar da queda de transmissão dos últimos anos, ainda atinge um número considerável de indivíduos no Brasil e no mundo. A infecção ocorre pela entrada de tripomastigotas metacíclico, forma infectante do parasito, na corrente sanguínea do hospedeiro, transmitidas de diversas formas. Pouco se sabe sobre as proteínas menos abundantes inicialmente caracterizadas como ?proteínas hipotéticas? e seu papel na infecção e transmissão. Estas proteínas podem estar relacionadas a internalização do parasito ou até mesmo na sua viabilidade dentro da célula do hospedeiro e, consequentemente, na progressão da doença. Ainda não há cura para os indivíduos portadores da doença de Chagas crônica, portanto a investigação dessas proteínas é de extrema relevância para a descoberta de intervenções que possam prevenir de forma mais eficiente e/ou eliminar a doença de Chagas. O objetivo deste trabalho foi clonar genes que codificam ?proteínas hipotéticas? para que futuramente auxilie em estudos que irão elucidar as funções dessas proteínas. Para isso, foi feita uma análise por filtros dos genes anotados como ?proteínas hipotéticas? de Trypanosoma cruzi no banco de dados Tritrypdb, dos quais 3 genes, nomeados como 03.100, 21.20 e 41.250, foram selecionados para a clonagem. Foi visto que os genes 03.100 e 21.20 possuem sintenia com outras espécies de Trypanosoma, portanto são genes conservados, e apresentam domínio de dimerização-ancoragem da superfamília de subunidade reguladora de PKA. Já o gene 41.250 é um gene espécie-específico de Trypanosoma cruzi, pois não foi encontrado em outros organismos e apresenta domínio semelhante às proteínas da família PLAC8, um domínio originalmente encontrado em proteínas placentárias de mamíferos. Além disso, uma análise de comparação por BLAST dos três genes, não evidenciou similaridade deles com outros previamente conhecidos. Desta forma, esses genes foram clonados, sequenciados e estarão disponíveis para que novos estudos evidenciem as funções de cada proteína no parasita.