Direcionamento in vivo de epítopos do HIV para células dendríticas como estratégia vacinal

Abstract

A epidemia causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) é a infecção mais emergente das últimas décadas e, até o momento, não existe uma vacina eficaz disponível. Diversos estudos indicam que anticorpos, linfócitos T (LT) CD4+ e CD8+ desempenham um papel importante na imunidade contra o HIV. Em relação ao desenvolvimento de vacinas baseadas na indução de imunidade celular, acredita-se que a geração de respostas imunes amplas e funcionalmente relevantes contra epítopos conservados de LT CD4+ e CD8+ , seja um pré-requisito essencial para novos candidatos à vacina. Em estudos prévios, nosso grupo demonstrou que a imunização de camundongos com uma vacina de DNA, codificando epítopos para LT CD4+ do HIV-1, foi capaz de induzir resposta específica e ampla de LT CD4+ e CD8+ . Apesar dos resultados obtidos serem bastante promissores, vacinas de DNA apresentam limitada imunogenicidade em humanos. Por esse motivo, diferentes estratégias vêm sendo utilizadas para o desenvolvimento de novos imunógenos. Diversos estudos têm focado no desenvolvimento de vacinas baseadas na capacidade de células dendríticas (DC) em modular as respostas imunes adaptativas. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo gerar um anticorpo monoclonal (mAb) quimérico contra um receptor de superfície das DCs (DEC205) em fusão com epítopos do HIV. Para tal, foi produzido um mAb quimérico ?DEC205 fusionado a uma sequência de oito epítopos para linfócitos T CD4+ do HIV (denominada HIVBr8) e uma vacina de DNA codificando os mesmos epítopos. Em seguida, os mAbs foram submetidos a um ensaio de ligação com células CHO e esplenócitos murinos para verificar a capacidade de ligação destes anticorpos. Ambos se ligaram de maneira dose dependente e específica ao receptor DEC205 em células CHO DEC205+ e em células dendríticas CD8? + . A fim de avaliar a melhor via de imunização, camundongos BALB/c foram imunizados com o mAb ?DEC205HIVBr8 pela via subcutânea (S.C.) ou intraperitoneal (I.P.) na presença do adjuvante poly I:C. Os animais imunizados pela via I.P. apresentaram maior número de células produtoras de IFN? e proliferação de LT CD4+ e CD8+ específicos quando comparado ao grupo imunizado pela via S.C. Posteriormente, avaliamos o esquema de imunização prime-boost heterólogo (DNA/ mAb ou vice-versa). Para tal, os animais foram imunizados com uma dose da vacina de DNA HIVBr8 pela via intramuscular seguida de uma dose de ?DEC205HIVBr8 na presença de poly I:C pela via intraperitoneal ou vice-versa. A resposta imune foi comparada aos grupos que receberam duas doses de DNA ou duas doses de mAb (prime-boost homólogo). Tanto o grupo que recebeu duas doses de ?DEC205HIVBr8 quanto o grupo que recebeu HIVBr8/?DEC205HIVBr8 apresentaram maior número de células produtoras de IFN? e maior porcentagem de LT CD4+ e CD8+ polifuncionais HIV-específicos quando comparados aos demais grupos. Baseados nesses resultados, podemos concluir que o mAb ?DEC205HIVBr8 e a vacina de DNA que codifica os mesmos epítopos foram produzidos com sucesso. Além disso, a melhor estratégia vacinal é composta por duas doses de ?DEC205HIVBr8 na presença de poly I:C administrados pela via intraperitoneal ou com uma dose de DNA HIVBr8 seguida de uma dose de ?DEC205HIVBr8.