Estratégia de garantia de qualidade para genotipagem de grupos sanguíneos em larga escala

Abstract

Os ensaios moleculares de alto rendimento são ferramentas essenciais para a pesquisa de doadores de sangue raros. O presente estudo tem como objetivo avaliar um fluxo de trabalho totalmente automatizado projetado para a genotipagem dos antígenos eritrocitários e plaquetários dos doadores de sangue usando o sistema de PCR em tempo real no equipamento QuantStudio. Foram genotipados 5.487 doadores de sangue utilizando a estratégia proposta nos seguintes passos: Extração de DNA no equipamento QIASymphony®, quantificação do DNA extraído no equipamento Nanodrop, normalização do DNA pelo equipamento epmotion e setup de PCR pelo equipamento Epmotion e genotipagem dos mais importantes antígenos eritrocitários e plaquetários por um ensaio personalizado configurado para o sistema de PCR em tempo real pelo equipamento QuantStudio. Foram testados 142.662 polimorfismos de nucleotídeo único em 59 lâminas, testando 26 SNPs. Os parâmetros avaliados na padronização dessa estratégia foram: capacidade do método em processamento das amostras em larga escala, qualidade dos resultados, porcentagem de ensaios com resultados válidos, exatidão e precisão do método. As amostras apresentaram média de call rate (qualidade dos resultados por amostra) de 80.3% e os ensaios (polimorfismos avaliados) apresentaram qualidade média de 87.3%. A exatidão foi controlada por meio de 50 amostras testadas e utilizadas como controle, as quais apresentaram apenas 0,39% de discrepância entre os resultados previamente testados. A técnica apresentou 99,6% de acurácia global e a reprodutibilidade foi de 99,74%. O software foi criado com a finalidade de interface de dados e organização de um banco de dados para utilização em uma base regular para encontrar sangue compatível para pacientes aloimunizados. A estratégia de genotipagem totalmente automatizada proposta é precisa, rápida e adequada para atender às necessidades de um laboratório de imuno-hematologia.